液氮超低溫保藏**是將菌種密封在有保護(hù)劑的安瓿管內(nèi)，經(jīng)控制速度凍結(jié)后，在-150℃～-196℃液態(tài)氮超低溫罐中保藏。 1.菌種制備
保藏孢子時(shí)，取孢子制成懸液，加入保護(hù)劑，裝入無(wú)菌安瓿管內(nèi)。保存菌絲體時(shí)，用液體振蕩法培養(yǎng)菌絲球，或用平板培養(yǎng)菌絲體，也可用麥粒菌種。取適量放入無(wú)菌的裝有保護(hù)劑的安瓿管內(nèi)。
2.安瓿管
制作安瓿管的玻璃，要具有經(jīng)受溫度突變而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)容易打開的特點(diǎn)。一般采用硼硅玻璃，管的大小根據(jù)需要而定，通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液體的安瓿瓶比較合適。選好安瓿管后，每管加進(jìn)0.8毫米保護(hù)劑，塞上棉塞，在1千克/平方厘米壓力下滅菌15分鐘，供凍結(jié)瓊脂菌絲片或麥粒菌種用。如凍結(jié)孢子懸液時(shí)，則空管滅菌。
3.保護(hù)劑
用體積比10%甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液作保護(hù)劑。
4.凍結(jié)保藏
將上述準(zhǔn)備好的菌種以無(wú)菌操作移入加有保護(hù)劑的安瓿管中，用火焰將安瓿管上部熔封，浸在水中檢查有無(wú)漏氣。然后將封口的安瓿管放在慢速凍結(jié)器內(nèi)，控制凍結(jié)速度，一般每一分鐘降低1℃，使樣品逐步均勻地凍結(jié)到－40℃。－40℃以下的凍結(jié)速度，可不用控制而迅速下降。安瓿管凍結(jié)后，立即放入山立牌液氮罐中。罐內(nèi)的氣相溫度為－150℃，液體溫度為－196℃。
5.恢復(fù)培養(yǎng)
需要使用保藏菌種時(shí)，將安瓿管從液氮罐中取出，立即放入33～40℃的水浴中振蕩至管內(nèi)凍結(jié)物全部融解，開啟安瓿管，將管內(nèi)菌種接入適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
液氮超低溫保藏是目前長(zhǎng)期保藏菌種的****的一種方法，用它進(jìn)行保藏各類食用菌的菌種都獲得了滿意的結(jié)果。
早前常用的液氮罐的容積有10升、35升兩種，也有更大的，如美國(guó)菌種保藏委員會(huì)（ATCC）使用的容積達(dá)250升和650升。常用的備用液氮罐容積為10～35升，也有100升的。由于液氮來(lái)源困難、
液氮罐設(shè)備費(fèi)用大，目前這種保藏方法還未廣泛普及使用。現(xiàn)在以前的液氮超低溫保存問題。設(shè)備和保存成本已經(jīng)大大降低了，有關(guān)液氮超低溫保存的相關(guān)問題山立低溫提供免費(fèi)咨詢，歡迎來(lái)電
